Estudio de la inflamación e inmunodepresión en la isquemia cerebralefecto de la hiperglicemia

Resumen

El trabajo de esta tesis se ha basado en el estudio de mecanismos implicados en la inflamación tras la isquemia cerebral y alteración de la respuesta inmune derivada de la lesión cerebral aguda que causa la isquemia. Los objetivos concretos han sido: 1) Determinar el papel de los glucocorticoides y de la infiltración de neutrófilos en el efecto negativo de la hiperglicemia en la isquemia. 2) Cuantificar in vivo la inducción de la expresión de la molécula de adhesión vascular (VCAM-1) en el endotelio vascular cerebral, determinar el posible beneficio de su bloqueo con anticuerpos específicos in vivo y evaluar el efecto de este tratamiento en la infiltración de leucocitos al tejido isquémico. 3) Caracterizar in vivo las alteraciones en el contenido de células T en órganos linfoides después de la isquemia cerebral utilizando una técnica de imagen óptica tomográfica en ratones transgénicos que expresan la proteína verde fluorescente (GFP) en la población de linfocitos T. Los resultados de la tesis se han organizado en forma de tres trabajos. Los resultados del primer trabajo muestran que la hiperglicemia aguda exacerba la lesión isquémica, tal como hemos mostrado utilizando técnicas de resonancia magnética, midiendo el volumen de infarto cerebral, y mediante valoración neurológica. Este efecto no puede explicarse únicamente por la liberación de glucocorticoides, según hemos demostrado utilizando un inhibidor de la síntesis de los mismos. La infiltración de neutrófilos también está aumentada por la hiperglicemia pero, estos no son causa del daño sino, probablemente, una consecuencia. Hemos descrito por primera vez que la hiperglicemia en la isquemia induce O-glicosilación de proteínas que podría contribuir a la lesión. El segundo trabajo ha mostrado la inducción de la molécula de adhesión VCAM-1 tras la isquemia cerebral transitoria, y su curso temporal. Este estudio ha permitido cuantificar la expresión de VCAM-1 en el endotelio vascular utilizando la técnica de inyección in vivo de anticuerpos radioactivos. El bloqueo de VCAM-1 mediante anticuerpos no redujo el volumen de lesión ni mejoró el déficit neurológico. Esto se atribuye a que a pesar de que disminuyó la infiltración de monocitos, la infiltración de leucocitos totales tendió a aumentar y se detectó un incremento en el número de neutrófilos y linfocitos. Utilizando la imagen óptica topográfica en ratones que expresan GFP en células T, el tercer trabajo demuestra in vivo la atrofia del timo y ganglios linfáticos tras la isquemia cerebral que evaluamos cuantificando la intensidad de la señal fluorescente en los órganos diana. La intensidad de la señal óptica medida in vivo correlaciona de forma estadísticamente significativa con el número de células T marcadas con GFP en cada órgano diana, según hemos evaluado por citometría de flujo. Por tanto, la intensidad de la señal fluorescente refleja el número de células T en cada órgano.