Alternativa terapéutica para el tratamiento de la inflamación crónica de la superficie ocular asociada a la reducción de la expresión de la trombospondina-1

Resumen

Las enfermedades inflamatorias de la superficie ocular, cada vez más comunes en nuestra sociedad, ponen en riesgo la visión y afectan a la calidad de vida de los pacientes que las sufren. Las múltiples causas que provocan reacciones inflamatorias en la superficie ocular involucran distintos factores humorales y celulares, lo que puede ocasionar fracasos al emplear tratamientos terapéuticos genéricos. El estudio de la fisiopatología de estas enfermedades puede ayudar en la búsqueda de tratamientos personalizados que ofrezcan una solución terapéutica más efectiva. Recientemente se ha demostrado la relación que existe entre el desarrollo de una inflamación ocular crónica y los niveles reducidos de la proteína matricelular trombospondina-1 (TSP-1). Por todo ello, el objetivo principal de esta tesis es el desarrollo de una alternativa terapéutica para prevenir o tratar la inflamación de la superficie ocular ligada a niveles reducidos de la TSP-1. Para estudiar la función de la TSP-1 en condiciones experimentales de inflamación ocular, se emplearon líneas celulares humanas de epitelio de córnea y de conjuntiva, así como cultivos primarios de conjuntiva humana y modelos in vivo en ratones. La metodología empleada incluye técnicas de análisis molecular como el Western blotting, la inmunofluorescencia, el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) o la reacción en cadena de la polimerasa con retrotranscripción (RT-PCR). Los resultados obtenidos mostraron que, en condiciones de inflamación, los niveles de expresión de la TSP-1 o del receptor CD36 disminuyen y no se activan los niveles de factor de crecimiento transformante (TGF)-β2 esperados, indicando la posible contribución de estas moléculas a la regulación de los procesos inflamatorios. Por todo ello, se seleccionó el péptido KRFK derivado de la TSP-1 y que activa el TGF-β, como potencial molécula terapéutica para estas patologías. Para probar la eficacia del péptido aplicado de manera tópica ocular, se emplearon ratones modificados genéticamente que no expresan la TSP-1 y que desarrollan una inflamación en la superficie ocular. Los resultados demuestran que el péptido KRFK derivado de la TSP-1 previene la aparición de signos inflamatorios en la superficie ocular, modulando el fenotipo de las células dendríticas en estos ratones. Ya que la aplicación tópica y local es la preferida para la administración de fármacos oculares, se propuso el desarrollo de un sistema de liberación de fármacos que encapsulara y protegiera al péptido seleccionado hasta el tejido donde ejerce su función. Se consideró el empleo de una formulación liposomal como posible sistema de encapsulación. Previamente a la encapsulación del péptido, se confirmó la funcionalidad in vitro de la formulación como sistema de liberación empleando una molécula anti-inflamatoria control, el acetato de medroxiprogesterona en células epiteliales corneales. Tras los resultados obtenidos, se evaluó si el péptido KRFK puede ser encapsulado en la formulación liposomal mejorando la penetración del péptido en la superficie ocular empleando modelos in vitro. Los resultados demuestran que el péptido puede ser encapsulado de modo eficiente, lo que mejora su biodisponibilidad y penetración en tejidos corneales. Este novedoso sistema desarrollado puede resultar de gran interés para las patologías inflamatorias crónicas de la superficie ocular asociadas a niveles disminuidos de la expresión de la TSP-1.