Caracterización de anticuerpos monoclonales contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico que identifican glia reactiva en el sistema nervioso central

Resumen

DURANTE LA REALIZACION DE LA PRESENTE TESIS DOCTORAL SE INMUNIZARON RATONES BALB/C CON LA LINEA CELULAR A431, MUY RICA EN EL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDERMICO (EGFR). DESPUES DE SELECCIONAR LOS RATONES CON MEJOR RESPUESTA INMUNITARIA DE ACUERDO CON LAS CARACTERISTICAS EXIGIDAS POR NOSOTROS, SE PROCEDIO A FUSIONAR SUS ESPLENOCITOS CON LA LINEA DE MIELOMA NO SECRETOR SP2. LOS MEDIOS CONDICIONADOS POR LOS HIBRIDOS OBTENIDOS SE ENSAYARON, Y DE ESTA FORMA SE SELECCIONARON TRES HIBRIDOS DENOMINADOS: 6E3, 5E12, 5B9. LOS ANTICUERPOS SECRETADOS POR ESTAS CELULAS MARCABAN LA LINEA CELULAR A431, PERO SOLAMENTE EL 5B9 ERA CAPAZ DE RECONOCER EL EGFR DESNATURALIZADO ENTERO EN EXPERIMENTOS DE INMUNOBLOTTING. ESTE ANTICUERPO, AL IGUAL QUE 5E12, IDENTIFICABAN UN DETERMINANTE ANTIGENICO AL MENOS PARCIALMENTE GLICOSILADO; PERO NINGUNO PRESENTABA REACTIVIDAD CRUZADA CON ANTIGENOS DEL GRUPO SANGUINEO HUMANO A. ADEMAS, EL 5B9 RECONOCIA LA LINEA CELULAR U118 IN VITRO, EN LA QUE TAMBIEN SE HA COMPROBADO LA EXISTENCIA DE EGFR. EN LESIONES EXPERIMENTALES INDUCIDAS EN EL CEREBRO DE RATA, EL 5B9 COLOCALIZABA ALGUNAS CELULAS CON EL ANTICUERPO ED1, MARCADOR DE MACROFAGOS/MICROGLIA. ESTA CARACTERISTICA DEBE INTERPRETARSE MUY PROBABLEMENTE, COMO LA PRESENCIA EN SUBPOBLACIONES MICROGLIALES REACTIVAS DE EPITOPOS GLICIDICOS RELACIONADOS CON EL EGFR. EN CEREBRO HUMANO NORMAL EL 5B9 RECONOCIA FUNDAMENTALMENTE AXONES, MIENTRAS QUE EN CEREBRO HUMANO LESIONADO ADEMAS LOCALIZABA TRACTOS ASTROGLIALES. LA MAYOR SIMILITUD DE MARCAJE SE CONSEGUIA CON UN ANTICUERPO ANTI-MAP2. EL DETERMINANTE ANTIGENICO SE EVIDENCIA EN UNA PROTEINA DE 81 KDA, QUE ERA MAS ABUNDANTE EN EL EXTRACTO DE CEREBRO NORMAL INSOLUBLE Y EN EL DE CEREBRO LESIONADO SOLUBLE. EL ANTICUERPO 5B9 RETIRABA O BLOQUEABA EN EL EXTRACTO DE CEREBRO, MOLECULAS CON LA CAPACIDAD DE INHIBIR LA PROLIFERACION ASTROGLIAL. SE CONCLUYE CON LA HIPOTESIS DE QUE EL ANTIGENO SE SITUA EN CEREBRO NORMAL EN ESTRUCTURAS