Identificación de marcadores para diagnóstico diferencial y potenciales dianas terapéuticas en adenocarcinoma ductal de páncreas mediante herramientas genómicas

Resumen

A pesar de los avances en diagnóstico y terapia, el cáncer de páncreas (PDAC) continúa siendo el de pero pronóstico de todos los tumores sólidos malignos. Durante el trabajo realizado en esta tesis doctoral, se llevó a cabo un análisis global de expresión génica en biopsias de PDAC, páncreas normal y pancreatitis crónica mediante microarrays de oligonucleótidos. Se identificaron transcritos diferencialmente expresados usando herramientas bioinformáticas, entre los cuáles, se seleccionaron 116 genes sobre-expresados en PDAC. Esta lista de genes se ordenó bajo un sistema de propiedad, teniendo en cuenta datos experimentales y bibliográficos. La expresión de 34 de estos genes se analzómediante RE-PCR cuantitativa a tiempo real para validar el resultado del microarray. Se clonaron y expresaron 10 de las proteínas codificadas por los genes diana y se generaron anticuerpos policlonales contra dos de ellas. Cinco de las proteínas codificadas por los genes identificados y validados por Q-RT-PCR, se detectaron también a mayor nivel en biopsias de PDAC respecto a los controles, mediante western-blotting. Así mismo, se evaluó el interés de algunos de estos anticuerpos como marcadores de diagnóstico diferencial el PDAC mediante inmunohistoquímic. Mediante una colaboración, se desarrolló un modelo animal de adenocarcinoma ductal de páncreas que reprodujo en cuanto a anatomía e histología las características del PDAC humano. Además se confirmó que los tumores de páncreas desarrollados por xenotrasplante en ratón, expresaban algunas de las dianas identificadas en las biopsias de PDAC humano, lo que permitirá ensayar, in vivo, terapias dirigidas contra los genes y proteínas identificadas.