Análisis molecular del establecimiento de la impronta en los genes u2af1-rs1 y h19 en la línea germinal masculina

Resumen

En el presente trabajo se ha analizado el patrón de metilación y la estructura de la cromatina de dos genes con impronta opuesta, U2af1-rs1 (impronta materna) y H19 (impronta paterna), en tres estadios del desarrollo de la línea germinal masculina de ratón: en células germinales embrionarias de la línea EG-1, derivadas de PGCs de embriones de 8,5 dpc, en espermatogonias de testículos de 6-7 días de edad y en los espermatozoides maduros. En el ensayo se incluyó, entre otros controles, la línea EG-3 derivada de PGCs de ratones de sexo femenino de 8,5 días de desarrollo. El gen U2af1-rs1 se encontró totalmente desmetilado en las células germinales embrionarias masculinas y femeninas, lo que indica que el borrador del patrón de improtan de este gen se ha producido ya en la línea germinal en el embrión de 8,5 dpc. El porcentaje de metilación aumentó conforme lo hizo el grado de diferenciación de las células analizadas y, sorprendentemente, se correspondió con niveles cada vez mayores de expresión génica. Los espermatozoides no mostraron el patrón de metilación correcto del gen U2af1-rs1, por lo que serán necesarias modificaciones posteriores tras la fecundación. Por otra parte, observamos la asociación de una estructura de la cromatina menos compactada con los alelos paternos del gen U2af1-rs1, así como también la presencia de sitios hipersensibles a la DNasa-I. En las células germinales embrionarias femeninas, pero no en las masculinas, se encontró borrado el patrón de impronta del gen H19 heredado de los progenitores. El porcentaje de metilación aumentó en las células germinales más diferenciadas, detectándose la metilación de ambos alelos en los espermatozoides (patrón de impronta establecido). Una estructura de la cromatina menos compactada y la presencia de sitios hipersensibles a la DNasa-I se encontraron asociadas a los alelos maternos no improntados del gen H19. Por otra parte, de los resulta