Producción de lactógeno placentario humano en suspensiones celulares de tabacoescalado del proceso y producción en biorreactores

Abstract

La Tesis Doctoral que se presenta tiene como objetivo establecer un sistema para la producción heteróloga de lactógeno placentario humano (hPL) mediante el cultivo de suspensiones celulares transgénicas de Nicotiana tabacum cv. BY2 en biorreactores y bajo condiciones controladas. El lactógeno placentario humano es una hormona polipeptídica que se sintetiza en la placenta durante el embarazo, y cuya actividad biológica se relaciona con el aumento del número de células b pancreáticas humanas, lo que le confiere una potencialidad terapéutica en el desarrollo de terapias contra la diabetes. Como resultado principal de este trabajo, se han obtenido suspensiones celulares transgénicas de tabaco, que producen la proteína hPL recombinante conservando su actividad biológica. Asimismo, se han determinado los parámetros de la estrategia de cultivo de las suspensiones con el fin de optimizar la cantidad de proteína recombinante producida por las células. Además, se ha desarrollado un sistema de expresión que dirige la proteína a la ruta secretora, haciendo que esta se acumule en el medio de cultivo. Como parámetros óptimos se han obtenido, un inóculo inicial de 10 gL-1 y un periodo de cultivo de 9 días, sometido a una pO2 mayor del 20%, una temperatura de 26 ºC y 180 rpm. En estas condiciones los niveles máximos de proteína recombínate secretada al medio de cultivo se obtienen a los 7 días.