Nuevas metodologías analíticas basadas en lc-itms para la determinación de diuréticos y metabolitos en fluidos biológicos

Abstract

Los diuréticos abarcan una variada gama de compuestos ampliamente empleados en la lucha contra la hipertensión y en prácticas de dopaje en deporte. Entre ellos, los diuréticos del asa o alta eficacia (representados por bumetanida, furosemida, piretanida y torasemida) y los diuréticos tiazídicos (con su máximo exponente hidroclorotiazida) son ampliamente prescritos y empleados en terapia simple o terapia combinada. El presente trabajo desarrolla un método de determinación de diuréticos en matrices biológicas (sangre y orina) mediante cromatografía líquida con detección por espectrometría de masas con analizador de trampa de iones (LC-ITMS). Para ello, se llevó a cabo un estudio exhaustivo de los parámetros de la separación cromatográfica, mientras que los parámetros operacionales propios del ITMS y los correspondientes a los compuestos a estudio fueron estudiados mediante infusión directa. De este modo, se desarrolló un método de determinación MS/MS con que cuantificar los diuréticos a estudio en los bajos niveles de concentración requeridos. A continuación se aplicó el método desarrollado a las matrices biológicas sangre y orina. Se estudió la posible existencia de efecto matriz y los tratamientos previos de muestra más adecuados. Las sistemáticas desarrolladas (dilución y filtrado de orina y precipitación de proteínas, centrifugado y filtrado de plasma) resultaron extremadamente sencillas y fáciles aplicar. La evaluación analítica del método fue satisfactoria en ambas matrices La metodología desarrollada se aplicó con éxito a la determinación de los compuestos a estudio en muestras reales de voluntarios sanos que ingirieron dosis terapéuticas. Los bajos niveles de cuantificación alcanzados permitieron la determinación de todos los compuestos a estudio y varios metabolitos de torasemida (único compuestos que se metabolizaba extensivamente) y dejan la puerta abierta a futuros estudios clínicos de farmacocinética y farmacodinámica.