Caracterización genética y bioquímica de la proteína trwd

Resumen

TrwD es una proteína implicada en el proceso de la conjugación bacteriana del plásmido R388. Forma parte de una amplia familia de proteínas, presentes en diversos sistemas de secreción de macromoléculas. Ésta es la familia de proteínas VirB11, que tienen la característica de poseer actividad ATP hidrolasa. Uno de los objetivos de la presente tesis era estudiar la interacción de TrwD con la membrana, empleando para ello liposomas como membranas modelo. La proteína era capaz de unirse a las vesículas lipídicas, integrándose en la monocapa externa,sin afectar a la interna y se encontró en un equilibrio entre una forma a la membrana y una forma soluble. Por otro lado,se hizo un estudio de la relación estructura-función, para lo cual se diseñó y seleccionó una serie de mutantes. Tres de los mutantes construídos se comprobó que se unían a la membrana interna bacteriana com mayor afinidad que la proteína nativa, mientras que un cuarto mutante presentaba una menor afinidad por los nucleótidos trifosfatos que la proteína nativa. Además, se analizaron 200 compuestos comerciales de referencia en busca de posibles inhibidores de la conjugación bacteriana, y posteriormente se estudiaron las dianas sobre las que estaban ejerciendo su acción. Entre los compuestos estudiados, se seleccionaron dos ácidos grasos insaturados, que resultaron ser inhibidores no competitivos de la actividad ATPasa de TrwD.