Estudio molecular y funcional de los canales de calcio de las células cromafines de la médula adrenal

Resum

Los canales de Ca2+ dependientes de voltaje (CCDV) están formados por varias subunidades proteicas. Se han identificado diferentes subunidades que codifican para los subtipos de CCDV funcionales: L, N, P/Q, R y T. Estudios electrofisiológicos y farmacológicos han puesto de manifiesto la diversidad de subtipos de CCDV existentes en las células cromafines de la médula adrenal (L, N Y P/Q), sin embargo, no existen datos moleculares que sustenten dicha diversidad, o si estos subtipos de CCDV están homogéneamente distribuidos en las células adrenérgicas y noradrenérgicas. En este trabajo, mediante cromafines bovinas, se han obtenido tres secuencias nucleotídicas que codifican, respectivamente, para los CCDV L, N Y P/Q. Utilizando estas secuencias como sondas en experimentos de hibridación in situ, realizados en secciones de glándula adrenal bovina, hemos demostrado que el mRNA de la subunidad se expresa por toda la médula. Sin embargo, las subunidades se expresan más abundantemente en la región interna de la médula, donde se localizan las células noradrenérgicas. Además, utilizando la técnica de RT-PCR y oligonucleótidos cebadores selectivos diseñados para amplificar diferentes subunidaes y auxiliares de los CCDV, se han identificado múltiples subunidades en estas células, algunas de totalmente inesperadas. Estos resultados moleculares amplían, la concepción actual sobre la diversidad de CCDV existente en estas células y sientan las bases para posteriores estudios biofísicos de los mismos. Además, en este estudio, hemos investigado la posible especialización de algún subtipo de CCDV de las células cromafines en el control de funciones no relacionadas con la secreción. Combinando experimentos de Western blot (midiendo la expresión de la proteína SNAP-25) con registros de Ca2+ intracelular, hemos demostrado que la despolarización con K+ produce un aumento de expresión de la proteína, el cual es independie