Estudio de los dominios de unión a ácidos nucleicos en el conector del bacteriófago ²29

Résumé

El conector del bacteriofago phi 29 es una estructura macroproteínica que se sitúa en uno de los vértices de la cabeza del virus. Su función está relacionada con la translocación del DNA durante los procesos de empaquetamiento e inyección del DNA viral, y por tanto presenta dominios de unión con dicho ácido nucleico. Además también presenta regiones de interacción con un RNA (pRNA) que resulta necesario para la unión posterior con el DNA. En este trabajo se estudia la interacción con ambos tipos de ácidos nucleicos y también se localizan los dominios de unión en la estructura tridimensional del conector. Para situar estas regiones en la estructura cuaternaria de la proteína, se emplean anticuerpos obtenidos siguiendo tres estrategias diferentes. Por un lado se utilizaron anticuerpos policlonales obtenidos mediante inmunización con péptidos, y también anticuerpos monoclonales. Por otro, se desarrolló una nueva metodología que permite la purificación de anticuerpos policlonales monoespecíficos de secuencia a partir de un policlonal general frente al conector completo. Con los diferentes anticuerpos se procedió a la obtención de complejos que se analizaron mediante microscopía electrónica de transmisión, y tras procesar diferentes cantidades de las imágenes obtenidas resultaron medias finales en las que se pudo definir la zona de reconocimiento estableciendo la relación secuencia-estructura que se perseguía.