Estudio de la actividad biológica del factor derivado del epitelio pigmentado (pedf)

Résumé

El factor derivado de lepitelio pigmentado (PEDF) es una glicoproteína miembro de la superfamilia de las serpinas. Se describió inicialmente como producto de secreción del epitelio pigmentado de la retina encargado de promover el desarrollo de la retina neuronal. Relacionado con esto, se han derivado varias actividades como factor neurotrófico y neuroprotector, entre ellas la inducción de diferenciación de células de retinoblastoma (Y-79), la protección frente a la toxicidad inducida por glutamato en neuronas cerebelares y en motoneuronas, la protección frente a la toxicidad inducida por peróxicidad inducida por peróxido de hidrógeno en neuronas de la retina o la protección morfológica y funcional de fotorreceptores. Recientemente se ha descrito una actividad como factor inhibidor de la formación de vasos (Angiogénesis) y como inhibidor del crecimiento tumoral. Las propiedades superficiales de carga de PEDF son de particular relevancia, al permitirle su unión al receptor en la superficie celular. No obstante también confieren a la proteína la capacidad de unir glicosaminoglicanos, componentes de la matriz extracelular. Se ha llegado a proponer mediante modelización molecular un sitio de unión compuesto por aminoácidos de carácter básico. La presencia de glicosaminoglicanos fuenciona meramente como soporte celular, ha sido descrita su participación en la actividad de moleculas señalizadoras extracelulares. Hemos descrito un protocolo de purificación de PEDF sobreexpresado en células eucariotas (BHK) mediante doble cormatografía de intercambio catiónico-aniónico, así como un ensayo ELISA para determinar la concentración de PEDF. Hemos sintetizado péptido componentes de la zona neurotrófica de la proteína y hemos construído sueros frente a éstos. Los sueros han sido caracterizados mediante western blot y ELISA. Se ha realizado el análisis, mediante mutagénesis dirigida, de la unión de PEDF a glic