Diseño, desarrollo y validación del test de genotipado sanguíneo ID RHD XT. Determinación de las variantes genéticas más frecuentes que codifican la expresión nula o débil del antígeno eritrocitario RhD

Résumé

Los antígenos del sistema Rh son los responsables de las reacciones hemolíticas asociadas a la incompatibilidad sanguínea donante ¿ receptor, de la inmunización en los pacientes politransfundidos, de la enfermedad del feto y del recién nacido (EHRN) como consecuencia de la incompatibilidad sanguínea materno-fetal (Connie 2010; Keramati et al; 2011) y de algunas anemias hemolíticas autoinmunes (Flegel, 2011). Debido a que algunas variantes del gen RHD son difíciles de detectar serológicamente y podrían ser mal descritas como Rh D negativo (D-), es necesario realizar un estudio exhaustivo de los donantes D- para identificar las unidades de hematíes que potencialmente pueden causar aloinmunización. Algunas de estas variantes D del sistema Rh potencialmente inmunogénicas, como DEL, D parcial, y algunos tipos weak D, con frecuencia no son detectados por pruebas serológicas de rutina (Daniels, 2013a). Como consecuencia, individuos D- transfundidos con sangre de donantes negativos mal clasificados (en realidad son D+ de difícil detección) pueden sufrir riesgo de aloinmunización anti-D. Para superar esta limitación serológica, el objetivo de este proyecto ha sido el desarrollo de una herramienta de detección molecular denominada ID RHD XT, basada en PCR multiplex y detección por tecnología X-MAP de Luminex®, aplicable tanto en pacientes como en donantes, que nos permita detectar ciertas variantes del gen RHD, así como los antígenos plaquetarios HPA-1a y HPA-1b (los cuales desempeñan un papel crucial por ser causantes de la trombocitopenia fetal/neonatal aloinmune o TFNA). Durante las fases de diseño, desarrollo de este test de genotipado en el que además se han cumplido los criterios preestablecidos de calidad y en los resultados en los estudios de verificación realizados son positivos se puede afirmar que el ensayo es preciso y fiable.El desarrollo de este ensayo constituye una herramienta aplicable en la rutina de los bancos de sangre como apoyo a la serología, lo que conduce a una mejora de la calidad de la asistencia sanitaria en la población reduciendo los problemas inmunológicos asociados a la terapia transfusional.