Alfa-hemolisina de escherichia colipurificación e interacción con membranas

Resum

LA ALFA-HEMOLISINA ES UNA PROTEINA TOXICA, SECRETADA AL MEDIO EXOCELULAR POR ESCHERICHIA COLI, CAPAZ DE ATACAR A CELULAS EUCARIOTICAS TALES COMO LEUCOCITOS O FIBOBLASTOS, EJERCIENDO SOBRE ELLAS EFECTOS CITOTOXICOS, ASI COMO DE LISAR ERITROCITOS DE VARIAS ESPECIES ANIMALES. AUNQUE SU CARACTERIZACION A NIVEL GENETICO HA SIDO BASTANTE EXHAUSTIVA, SU COMPORTAMIENTO A NIVEL FISICO-QUIMICO Y SU MECANISMO DE ACCION FRENTE A LAS CELULAS A LAS QUE ATACA SON VIRTUALMENTE DESCONOCIDOS A NIVEL MOLECULAR, DEBIDO, EN PARTE, A LA FALTA DE PREPARACIONES DE ESTA PROTEINA LO SUFICIENTEMENTE PURAS COMO PARA PERMITIR ESE TIPO DE ESTUDIOS. EN EL PRESENTE TRABAJO SE HA ENCONTRADO UN METODO ADECUADO DE PURIFICACION DE LA TOXINA ACTIVA QUE HA PERMITIDO UNA MEJOR CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE LA HEMOLISINA. ADEMAS, SE HA PODIDO REALIZAR UN ESTUDIO MAS EXHAUSTIVO DE SU MECANISMO DE ACCION MEDIANTE LA UTILIZACION DE LIPOSOMAS UNILAMELARES COMO MODELO DE MEMBRANA, MAS SENCILLO QUE LAS MEMBRANAS DE LA CELULA DIANA. SE HA APLICADO LA ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA PARA EL ANALISIS DE LOS FENOMENOS DE LIBERACION DE CONTENIDOS ACUOSOS INDUCIDOS POR LA TOXINA, ASI COMO PARA DETERMINAR LA UNION DE LA PROTEINA A BICAPAS FOSFOLIPIDICAS.