Transporte nucleocitoplásmico de nucleoplasmina y rna polimerasa del bacteriofago t7 en sistemas in vitro

Resum

La comunicación entre el núcleo y el citoplasma es un proceso de gran importancia para la célula, ya que en el interior del núcleo reside la información genética, mientras que en el citoplasma se encuentra la maquinaria de síntesis proteica. Estas dos actividades, la nuclear y la citoplásmica, se encuentran separadas físicamente por la envoltura nuclear, y para integrarlas es necesario que exista un mecanismo de transporte a través de la envoltura nuclear. El presente trabajo de investigación profundiza en el conocimiento de las características que rigen el transporte nucleocitoplásmico de proteínas cariofílicas. Para ello hemos realizado dos ensayos de transporte in vitro. El primero de ellos se basa en el estudio del transporte de la RNA polimerasa del bacteriófago T7, una proteína no cariofílica, a la cual se le ha añadido una secuencia de localización nuclear que hace que se comporte como una proteína cariofílica en un ensayo de transporte nucleocitoplásmico en células NRK permeabilizadas con digitonina. En nuestro ensayo, el transporte de esta proteína recombinante cumple las siguientes características: es dependiente de la secuencia de localización nuclear añadida, es necesaria la acción de factores solubles, y el transporte es dependiente de energía. Además, el hecho de que el anticuerpo monoclonal QE5, que reconoce las nucleoporinas NUP214, NUP153 y p62 bloquee el transporte de esta proteína, y no lo inhibian anticuerpos frente a la NUP214 ni anticuerpos frente a la NUP153 es un indicativo de que, en nuestras condiciones, la p62 está implicada en la importanción de esta proteína cariofílica. De forma paralela, hemos desarrollado un nuevo ensayo de transporte in vitro cuyo resultado se detecta al microscopio electrónico. Este método consiste en colocar un núcleo aislado de oocito de Xenopus laevis en presencia de un extracto de huevos de Xenopus en el interior de