Regulación de la transcripción del gen snd p102 de rata

Resumo

La SND p12 es una proteína purificada de retículo endoplásmico de hepatocitos de rata cuya función es aún desconocida. Se ha comprobado que presenta actividad hidrolítica de éteres de colesterol en microsomas de hepatocitos de rata y estudios recientes de sobreexpresión apuntan a un papel del proteína en la secreción de fosfolípidos en las lipoproteínas. La regulación de la expresión génica es un proceso fundamental en el control del metabolismo celular, siendo la transcripción el punto de regulación más importante. En este trabajo se presenta el estudio de la regulación transcripcional del gen SND p102 de rata, que supone el aislamiento, clonación y análisis funcional de la región promotora. El aislamiento se lleva a cabo mediante un proceso de rastreo genómico que resulta en la obtención de una nueva secuencia de 1688 bases (AY957585), localizándose el origen de transcripción 216 bases corriente arriba del codón ATG de inicio dela traducción. La actividad promotora de la secuencia aislada se determina en fragmentos de deleción 5' que son clonados en un vector de expresión ecuariota, portador del gen indicador luciferasa y transfectados en células de hepatoma humano HepG2 y de rata McA-RH7777. Mediante análisis bioinformático se obtienen potenciales sitios de unión a diferentes factores de transcripción, comprobándose la unión de dos de ellos, Sp1 y NF-Y, mediante ensayos de retardo de la movilidad electroforética o EMSA. La mutagénesis dirigida de las secuencias de unión de estos factores de transcripción confirma su implicación en la regulación transcripcional del gen SND p102. Dado el papel de la proteína en el metabolismo lipídico, se estudia el efecto de diferentes agentes que modifican el metabolismo lipídico sobre la actividad transcripcional, si bien no se han observado variaciones en ninguna de las condiciones analizadas.