Diagnóstico molecular de la alergia a pleosporáceas mediada por ige. Valoración de los alérgenos alt a 1 y alt a 6 de alternaria alternata como marcadores diagnósticos

Résumé

Alternaria alternata constituye la especie alergénica de origen fúngico más importante en nuestro medio. En esta especie se han descrito dos alérgenos de gran importancia clínica; el alérgeno mayor Alt a 1 y Alt a 6 (enolasa), al que se le atribuye un papel fundamental en el fenómeno de reactividad cruzada con otras especies fúngicas. En este estudio, utilizando técnicas cuantitativas (ELISA) y cualitativas (SDS-PAGE e immunoblotting), se ha demostrado la expresión del alérgeno Alt a 1 en especies filogenéticamente próximas a A. alternata pertenecientes a la familia de las Pleosporáceas, como Alternaria tenuissima, Ulocladium botrytis y Stemphylium botryosum. Sin embargo, no se detectó la expresión de Alt a 1 en especies más alejadas filogenéticamente a Alternaria como Cladosporium herbarum, Penicillium chrysogenum y Aspergillus fumigatus. Además, mediante electroforesis bidimensional y tinción Coomassie blue, electroforesis bidimensional e immunoblotting, y análisis por huella peptídica MALDI-TOF; se han conseguido identificar y caracterizar dos nuevos alérgenos ortólogos a Alt a 1, en las especies fúngicas Ulocladium botrytis y Stemphylium botryosum (propuestos como Ulo b 1 y Ste b 1); confirmando la implicación de éste alérgeno en la reactividad cruzada de estas especies. Por otro lado, en el estudio de valoración diagnóstica de los alérgenos recombinantes Alt a 1 y Alt a 6 (enolasa) realizado en un grupo de pacientes con síntomas de alergia respiratoria a Alternaria; los resultados obtenidos mostraron que 28 de los 30 pacientes presentaron valores positivos de IgE específica frente a Alt a 1, y que los dos pacientes con valores negativos frente a Alt a 1, presentaron valores positivos frente a Alt a 6. De este modo, la combinación de los alérgenos Alt a 1 y Alt a 6 permitió cubrir el 100% de los pacientes analizados. Por lo tanto estos dos alérgenos pueden reemplazar el uso de los extractos fúngicos para el diagnóstico de la alergia a Alternaria. Además, estos dos pacientes también mostraron valores negativos frente a los CCD, y valores elevados de IgE específica frente a Asp f 6 y frente a los extractos de S.b, C.l, C.h, mayores de 10 kU/l. Los resultados obtenidos en estos dos pacientes indican que posiblemente hayan tenido un diagnóstico inicial erróneo al ser etiquetados como alérgicos a A.a. Este error queda justificado por la identificación de un nuevo alérgeno ortólogo a Asp f 6 en A. alternata. Por otro lado, la enolasa fúngica, Alt a 6, mostró reactividad en 11 de los 30 sueros analizados, en 4 de ellos, sueros 2, 7, 9 y 22, señalados con flecha amarilla, los valores de IgE específica frente a la enolasa fúngica fueron mayores o iguales que los exhibidos frente a las especies fúngicas no productoras de Alt a 1, C.l, A.f y C.h. De este modo la enolasa fúngica pudo justificar la reactividad cruzada existente en estos 4 pacientes. Los valores elevados de IgE específica presentados por el grupo de pacientes a estudio frente a los mohos no productores de Alt a 1 (C. lunata, C. herbarum y A. fumigatus); y las altas e inesperadas correlaciones demostradas entre A. alternata y C. herbarum, y entre A. alternata y A. fumigatus, sugieren la implicación de otras moléculas alergénicas, compartidas entre distintas especies fúngicas, en el desarrollo de la alergia a mohos. Podemos concluir que los alérgenos Alt a 1 y enolasa fúngica constituyen la principal herramienta para el diagnóstico de la alergia a hongos en nuestro medio. Además Alt a 1 es un sensibilizante primario en individuos que desarrollan alergia por Pleosporáceas y debería considerarse el principal marcador de sensibilización a mohos en España.