Utilidad de pla2g2a, cd84 y ubiquitina en el diagnóstico de las muestras de semen y en la selección de espermatozoides

Zusammenfassung

La infertilidad afecta hoy en día al 15% de las parejas en edad fértil. Su origen es difícil de determinar, no obstante, se estima que en un 50% de los casos es debido a un factor masculino. Sin embargo, en la actualidad, los medios de los que se dispone en la clínica para evaluar el potencial fértil de un varón se limitan a una valoración cuantitativa y morfológica, en cierta medida subjetiva, de los espermatozoides (spz). Del mismo modo, la selección de spz para los tratamientos, tampoco está basada en características moleculares. Con tal de mejorar estos aspectos, se están buscando marcadores moleculares en el spz que puedan ser utilizados como diagnóstico y a la vez como herramienta para la selección espermática pre-tratamiento. En esta línea, el presente proyecto tiene como objetivo evaluar el potencial uso de 3 moléculas como biomarcadores diagnósticos o pronósticos de las TRA y su posible aplicación en el enriquecimiento de una población espermática en células con las moléculas de interés, utilizando la técnica de MACS. Las tres moléculas candidatas -PLA2G2A, CD84, UBQ- han sido seleccionadas a partir de información obtenida en estudios previos del grupo y de la bibliografía disponible, por su relación con los resultados reproductivos, localización en el spz (membrana) y función. Con tal de evaluar el potencial uso de las candidatas como marcadores de calidad espermática se ha evaluado la relación entre su presencia (mediante citometría de flujo), en muestras capacitadas de spz utilizadas para TRA, con: los parámetros básicos del semen, la calidad de los embriones generados tras los tratamientos de ICSI y el éxito reproductivo de los tratamiento. De estos análisis se concluye con respecto al CD84 que no es un buen candidato a ser marcador de calidad seminal por su limitada presencia en las muestras espermáticas y la ausencia de correlaciones biológicamente importantes con los parámetros analizados. Con respecto a PLA2G2A, se han encontrado relaciones inversas entre su presencia y los parámetros de calidad seminal post capacitación, también se han descrito asociaciones directas entre algunas variables de buen desarrollo embrionario y la presencia de la molécula en espermatozoides, siendo estas relaciones muy poco robustas. En el caso de la UBQ se ha verificado que existe asociación entre su presencia en los spz y los parámetros básicos de calidad seminal y además por las asociaciones encontradas con la calidad embrionaria parece un buen candidato a predictor de buena calidad embrionaria en tratamientos con ovocitos propios. En cuanto a la valoración del uso de estas moléculas como base de la separación espermática con la técnica de MACS, se ha verificado la correcta separación de las dos poblaciones de spz (con y sin la molécula) mediante RT-PCR y se concluye que esta técnica no resulta eficiente, siendo necesaria la puesta a punto de los protocolos, con otros reactivos, para poder utilizar la técnica en el enriquecimiento de spz.