Caracterización y activación de enzimas lipolíticas en medios no acuosos

Résumé

EN PRIMER LUGAR, SE HA EXPLORADO POR PRIMERA VEZ, DE UNA FORMA SISTEMATICA, EL COMPORTAMIENTO DE LA FOSFOLIPASA A2 DE PANCREAS PORCINO (PPPLA2) EN MEDIOS ORGANICOS MONOFASICOS CON BAJO CONTENIDO EN AGUA. SE HA INVESTIGADO COMO PUEDEN MODULAR LAS ACTIVIDADES TANTO DESACILANTE COMO ACILANTE DE LA ENZIMA UN NUMERO DETERMINADO DE VARIABLES, ENCONTRANDOSE VARIOS RESULTADOS INTERESANTES E INESPERADOS, ENTRE LOS QUE CABE DESTACAR COMO MAS RELEVANTES, PARA LA PPPLA2 EN UN ENTORNO CON AGUA RESTRINGIDA, LOS SIGUIENTES: (I)ES SEFERAMENTE INHIBIDA POR MODERADAS CONCENTRACIONES DE FOSFOLIPIDOS SUSTRATO Y PRODUCTO, LO QUE TIENE IMPLICACIONES IMPORTANTES, PARTICULARMENTE CONCERNIENTES A SU ACTIVIDAD SINTETICA; (II)EXHIBE UNA NOTABLE ALTERACION DE SU SELECTIVIDAD HACIA LA CABEZA POLAR DE LOS SUSTRATOS CON RELACION A LA QUE MUESTRA EN LOS MEDIOS ACUOSOS; Y (III) PRESENTA UNA DISCRIMINACION EXQUISITA ENTRE ACIDOS GRASOS DE DISTINTA LONGITUD DE CADENA Y GRADO DE INSATURACION CUANDO LOS ESTERIFICA CON LPC. ADEMAS, ESTOS RESULTADOS SE HAN UTILIZADO PARA OPTIMIZAR LA EFICACIA SINTETICA DE LA ENZIMA EN MEDIO NO ACUOSO OBTENIENDOSE UN INCREMENTO DEL RENDIMIENTO EN LA SINTESIS DE PC DE CERCA DE TREINTA VECES CON RESPECTO A LOS DATOS APORTADOS PREVIAMENTE POR OTROS GRUPOS. EN SEGUNDO LUGAR, SE HA DESARROLLADO UNA ESTRATEGIA INNOVADORA, QUE DENOMINAMOS IMPRESION MOLECULAR DE ENZIMAS LIPOLITICAS BASADA EN ACTIVACION INTERFACIAL (IMAI), PARA LA OPTIMIZACION RACIONAL DE ESTAS ENZIMAS EN MEDIOS NO ACUOSOS. ESTA ESTRATEGIA EXPLOTA DE FORMA COMBINADA (I) LA CONOCIDA EXALTACION DE LA RIGIDEZ CONFORMACIONAL DE LAS PROTEINAS EN MEDIOS ANHIDROS Y (II) LOS CAMBIOS CONFORMACIONALES, EN TERMINOS DE INCREMENTO DE LA ACCESIBILIDAD DE SUSTRATO Y DE INDUCCION DE UNA RED CATALITICA MAS COMPETENTE, ASOCIADOS A LA ACTIVACION DE LA ENZIMA EN LAS INTERFASES LIPIDO/AGUA, PARA GENERAR FORMAS MANEJABLES Y ACTIVADAS (ATRAPADAS CINETICAMENTE) DE LAS ENZIMAS LIPOLITICAS. LOS RESULTA