Incorporación y expresión de genes quiméricos en células cotiledonares de pinus pinea l

Résumé

En este trabajo se estudian algunos de los requerimientos y metodologías necesarios para abordar la obtención de plantas transgénicas de Pinus pinea L., especie forestal de gran interés debido a su carácter frutal y ornamental. El material de partida es el tejido cotiledonar de embriones maduros de este pino, cuyo potencial regenerativo se comprueba en esta memoria, analizándose además el efecto causado por determinados agentes selectivos sobre el proceso de obtención de plántulas por caulogénesis adventicia. Así mismo, se demuestra la capacidad de los exudados cotiledonares para inducir la respuesta de virulencia de Agrobacterium tumefaciens, así como la susceptibilidad de este tejido para ser infectado por cepas salvajes de esta bacteria. También se investigan los factores que influyen en la transferencia de genes marcadores desde el ADN-T de la bacteria al tejido cotiledonar, y se desarrollan dos nuevos vectores binarios específicamente diseñados para la transformación de pináceas mediada por Agrobacterium, y que mejoran significativamente las tasas de transferencia del gen marcador. Para el diseño de estos vectores se utilizaron los datos obtenidos en el análisis de secuencias promotoras e intrónicas en Pinus pinea, lo cual ha requerido la puesta a punto de un protocolo de expresión genética transitoria usando la técnica del bombardeo de micropartículas. Así mismo, esta técnica se emplea en un intento de obtener plantas transgénicas de P. pinea resistentes a herbicidas. A lo largo de la memoria se discuten los problemas encontrados en la transformación de esta especie, y se proponen alternativas de futuro para superarlos.